检测生物组织中的糖类脂肪和蛋白质方法步骤

1．糖类的鉴定

(1)制备组织样液(去皮、切块、研磨、过滤)

实验要求：苹果或梨组织液必须临时制备。

解释：因苹果多酚氧化酶含量高，组织液很易被氧化成褐色，将产生的颜色掩盖。

(2)取1支试管，向试管内注入2mL组织样液。

(3)向试管内注入1mL新制的斐林试剂，振荡。

实验要求：应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存，使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂；切勿将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测。

解释：斐林试剂很不稳定，甲、乙液混合保存时，生成的在70～90℃下分解成黑色CuO和水；甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应，无生成。

(4)试管放在盛有50～65℃温水的大烧杯中，加热约2 min，观察到溶液颜色：浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。

实验要求：最好用试管夹夹住试管上部，使试管底部不触及烧杯底部，试管口不要朝向实验者。

解释：防止试管内的溶液冲出试管，造成烫伤。

淀粉的检测和观察：用试管取2mL待测组织样液，向试管内滴加2滴碘液，观察颜色变化。

实验要求：碘液不要滴太多。

解释：以免影响颜色观察。

2．脂肪的鉴定

(1)花生种子浸泡、去皮、切下一些子叶薄片，将薄片放在载玻片的水滴中。

实验要求：干种子要浸泡3～4h，新花生的浸泡时间可缩短。

解释：若浸泡时间短,不易切片；浸泡时间过长,组织较软，切下的薄片不易成形。切片要尽可能薄些，便于观察。

(2)在子叶薄片上滴2～3滴苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，染色3 min。

实验要求：染色时间不宜过长。

(3)用吸水纸吸去薄片周围染液，用50%酒精洗去浮色，吸去酒精。

解释：不洗去浮色，会影响对橘黄色脂肪滴的观察。

(4)滴上1～2滴蒸馏水，盖上盖玻片。

解释：滴上清水可防止盖盖玻片时产生气泡。

(5)低倍镜下寻找已着色颗粒，再用高倍镜观察，可看到细胞中有染成橘黄色或红色圆形小颗粒。

实验要求：装片不宜久放。

解释：时间较长，油滴会溶解在乙醇中。

3．蛋白质的鉴定

(1)制备组织样液(浸泡、去皮研磨、过滤)

解释：黄豆浸泡1至2d，容易研磨成浆，也可购新鲜豆浆以节约实验时间。

(2)鉴定

加样液约2 mL于试管中，加入双缩脲试剂A液,摇匀；再加入双缩脲试剂B液3～4滴,摇匀，溶液变紫色。

实验要求：A液和B液也要分开配制，储存；鉴定时先加A液后加B液；溶液不能多加。

解释：先加NaOH溶液，为与蛋白质反应提供一个碱性的环境；A、B液混装或同时加入，会导致变成沉淀，而失效；否则的蓝色会遮盖反应的真实颜色。

注：可用蛋清代替豆浆

实验要求：蛋清要先稀释。

解释：如果稀释不够，在实验中蛋清与双缩脲试剂反应后会粘固在试管内壁上，使反应不容易彻底，并且试管不易洗干净。